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以下是關(guān)人γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒的實驗使用說明,綜合整理自不同來源的可靠信息:
BS-0383人γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒
一、實驗原理?
該試劑盒采用?雙抗體夾心法ELISA技術(shù)?:
將捕獲抗體包被于微孔板上,結(jié)合樣品或標準品中的待測物IFI16p16。
加入生物素標記的檢測抗體,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體"復(fù)合物。
通過鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶(HRP)催化底物TMB顯色,顏色深淺與待測物濃度成正比,最終通過酶標儀測定吸光度(OD值)計算濃度。
二、試劑盒組成與儲存?
主要組分?:
包被抗體、檢測抗體、標準品、HRP標記物、顯色液(TMB)、終止液等。
儲存條件?:
未開封試劑盒需2-8℃避光保存;部分組分(如顯色液)需嚴格避光。
有效期?:通常為6個月,具體以標簽為準。
三、樣品處理要求?
血清/血漿?:
采集后室溫靜置2小時或4℃過夜,1000×g離心20分鐘,取上清保存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。
組織勻漿?:
用預(yù)冷PBS沖洗組織,按1:9(重量體積比)勻漿,離心取上清。
注意事項?:
避免溶血、高血脂或含NaN3的樣本(NaN3抑制HRP活性)。
四、操作步驟?
試劑準備?:
標準品需現(xiàn)用現(xiàn)配,不可保存;洗滌液按1:50稀釋。
加樣與孵育?:
依次加入標準品/樣品、檢測抗體、HRP標記物,每步需充分洗滌。
顯色與讀數(shù)?:
加入TMB顯色10-30分鐘,終止液終止反應(yīng)后,立即用450nm波長測OD值。
五、注意事項?
安全防護?:
避免接觸終止液和底物(有毒),操作時戴手套,勿用嘴吸取試劑。
實驗細節(jié)?:
加樣順序一致,避免氣泡;洗滌需拍干;顯色液避光保存。
質(zhì)量控制?:
每個標準品和樣品建議做復(fù)孔;超出檢測范圍需稀釋后重測。
六、常見問題?
顯色異常?:若孔內(nèi)呈綠色,表明終止液未混勻。
數(shù)據(jù)偏差?:可能由樣本處理、試劑批次或儀器誤差引起,需重復(fù)實驗驗證。
注:以上資料僅供參考,如需更詳細的操作圖示或標準曲線繪制方法,可參考試劑盒附帶的說明書或聯(lián)系供應(yīng)商獲取技術(shù)支持。
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