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Elisa實(shí)驗(yàn):加酶標(biāo)抗體操作
更新時(shí)間:2025-08-13瀏覽:27次

  Elisa實(shí)驗(yàn):加酶標(biāo)抗體操作

  以下是ELISA實(shí)驗(yàn)中?加酶標(biāo)抗體?操作的詳細(xì)步驟及注意事項(xiàng),綜合整理自實(shí)驗(yàn)指南:

  一、操作步驟

  抗體稀釋?

  使用封閉液(如5% BSA或脫脂奶粉)稀釋酶標(biāo)抗體至工作濃度(通常1:1000~1:50000)。

  稀釋后需充分混勻,避免氣泡產(chǎn)生。

  加樣與孵育?

  每孔加入100 μL稀釋后的酶標(biāo)抗體,避免觸碰孔壁或產(chǎn)生氣泡。

  37℃孵育30-60分鐘(時(shí)間根據(jù)說(shuō)明書調(diào)整)。

  洗滌?

  棄去孔內(nèi)液體,用PBST(含0.05% Tween-20的PBS)洗滌3-5次,每次浸泡1-2分鐘并拍干。

  手工洗板時(shí)需垂直拍板,避免交叉污染。


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  二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

  抗體選擇?

  夾心法:需確保酶標(biāo)抗體與包被抗體靶向抗原的不同表位,避免競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。

  間接法:酶標(biāo)二抗需與一抗種屬匹配(如兔抗鼠IgG-HRP)。

  質(zhì)量控制?

  設(shè)置空白對(duì)照(僅加稀釋液)和陰性對(duì)照(非特異性抗體),排除背景干擾。

  顯色后若整板OD值偏低,需檢查酶標(biāo)抗體活性或稀釋比例。

  其他要點(diǎn)?

  酶標(biāo)抗體需避光保存,現(xiàn)用現(xiàn)配。

  競(jìng)爭(zhēng)法中,酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原需同步加入。

  三、常見(jiàn)問(wèn)題處理

  非特異性結(jié)合?:增加封閉時(shí)間(2小時(shí)以上)或更換封閉液(如5%脫脂奶粉)。

  復(fù)孔差異大?:檢查移液器校準(zhǔn)及操作一致性。

  注:以上資料僅供參考,如需具體品牌說(shuō)明可進(jìn)一步提供貨號(hào)查詢?cè)敿?xì)參數(shù)。

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